Маҷмӯаи PCR Real Time Virus Monkeypox
Тафсилоти маҳсулот
Истифодаи пешбинишуда
Он барои ошкор кардани вируси маймун дар хунобаи инсон ё намунаҳои экссудати осеб тавассути системаҳои PCR дар вақти воқеӣ истифода мешавад.
Принсипи санҷиш
Ин маҳсулот системаи санҷиши PCR дар вақти воқеии Taqman® асосёфтаи флуоресцентӣ мебошад.Примерҳо ва зондҳои мушаххас барои ошкор кардани гени F3L вируси маймун пешбинӣ шудаанд.Назорати дохилӣ, ки ба гени ҳифзшудаи инсон нигаронида шудааст, ҷамъоварии намунаҳо, коркарди намунаҳо ва раванди PCR-ро дар вақти воқеӣ назорат мекунад, то аз натиҷаҳои бардурӯғ-манфӣ пешгирӣ кунад.Маҷмӯа як системаи пурраи лиофилизатсияшудаи пеш аз омехта мебошад, ки дорои маводҳои зарурӣ барои ошкор кардани вируси маймун аст: ферменти тақвияти кислотаи нуклеинӣ, ферменти UDG, буфери реаксия, праймери мушаххас ва зонд.
Мундариҷаи асосӣ
Компонентҳои пешниҳодшуда дар ҷадвал оварда шудаанд.
| Компонентхо | Баста | Компонент |
| Вируси маймунПремикси лиофилизатсияшуда | 8 рахи найҳои PCR× 6 халта | Примерҳо, зондҳо, dNTP/dUTP Mix, Mg2+, Так ДНК полимераза, Ферментҳои UDG |
| Назорати мусбати MPV | 400 мкл × 1 найча | пайдарпаии ДНК дорои гени Ҳадаф |
| Назорати манфии MPV | 400 мкл × 1 найча | пайдарпаии ДНК дорои сегменти генҳои инсон |
| Маҳлули ҳалкунанда | 1 мл × 1 найча | Стабилизатор |
| Сертификати мутобиқат | 1 дона | / |
Ҷараёни амалиёт
1. НамунаКоллексия:Намуна бояд мувофиқи он дар қубурҳои стерилизатсия ҷамъ карда шавад
бо нишондодҳои стандартии техникӣ.
2. Омода кардани реактив (минтақаи омодасозии реактив)
Қисмҳои маҷмӯаро берун кунед, онҳоро дар ҳарорати хонагӣ барои истифодаи интизорӣ мувозинат кунед.
3. Коркарди намуна (Майдони коркарди намуна)
3.1 Истеҳсоли кислотаи нуклеинӣ
Тавсия дода мешавад, ки 200 мкл намунаҳои моеъ, Назорати мусбӣ ва назорати манфӣ барои истихроҷи кислотаи нуклеин мувофиқи талабот ва тартиби мувофиқи маҷмӯаҳои истихроҷи ДНК вирусӣ гирифта шаванд.
3.2 Хокаи ҳалшавандаи лиофилизатсияшуда ва илова кардани қолаб
Мувофиқи миқдори намунаҳо премикси лиофилизшудаи вируси маймун тайёр кунед.Як намуна ба як найчаи PCR лозим аст, ки дорои хокаи премикси лиофилизатсияшуда мебошад.Назорати манфӣ ва назорати мусбат бояд ҳамчун ду намуна баррасӣ карда шаванд.
(1) Ба ҳар як найчаи ПТР, ки дорои премикси лиофилизонида шудааст, маҳлули 15 мкл маҳлул илова кунед ва баъд мутаносибан ба ҳар як найчаи ПТР 5 мкл намунаҳои истихроҷшуда/Назорати манфӣ/Назорати мусбӣ илова кунед.
(2) Қубурҳои ПТР-ро маҳкам пӯшонед, найҳои ПТР-ро бо дасти худ то он даме ки хокаи лиофилизатсияшуда пурра гудохта шавад ва омехта шавад, моеъро ба қаъри найҳои ПТР тавассути центрифугакунии фаврии пастсуръат ҷамъ кунед.
(3) Агар асбоби маъмулии PCR-ро барои муайянкунӣ истифода баред, пас найҳои PCR-ро мустақиман ба минтақаи пурқувват интиқол диҳед;агар барои муайян кардани БТК-8 истифода шавад, пас бояд амалҳои зеринро иҷро кунед: 10 мкл моеъро аз найчаи ПЗР ба чоҳи реаксияи микросхемаҳои БТК-8 интиқол диҳед.Як қубури PCR ба як чоҳи чип мувофиқат мекунад.Ҳангоми амалиёти пипетка, боварӣ ҳосил кунед, ки пипетка 90 дараҷа амудӣ аст.Маслиҳатҳои пипеткаҳои монеаи аэрозолӣ бояд дар маркази чоҳ бо қувваи мӯътадил ҷойгир карда шаванд ва ҳангоми расидан ба фишанги аввал тела додани пипеткаро бас кунед (барои пешгирӣ кардани футур).Пас аз пур кардани чоҳҳо, мембранаи микросхемаҳои реаксияро берун кунед, то ҳамаи чоҳҳоро пӯшонад ва чип пас аз он ба минтақаи муайянкунии пурқувват интиқол дода мешавад.
4. Амплификацияи PCR (Майдони ошкор)
4.1 Қубурҳои PCR/чипи реаксияро ба зарфи реаксия гузоред ва номҳои ҳар як чоҳро бо тартиби мувофиқ гузоред.
4.2 Танзимоти флуорессенси ошкор: (1) Вируси маймун (FAM);(2) Назорати дохилӣ (CY5).
4.3 Протоколи велосипедронии зеринро иҷро кунед
Протоколи ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
| Қадамҳо | Ҳарорат | Вақт | Сиклҳо | |
| 1 | Пеш аз денатуратсия | 95℃ | 2 дақиқа | 1 |
| 2 | Денатуратсия | 95℃ | 10 с | 45 |
| Табобат, васеъкунӣ, ба даст овардани флуоресцент | 60℃ | 30 с | ||
Протоколи BTK-8:
| Қадамҳо | Ҳарорат | Вақт | Сиклҳо | |
| 1 | Пеш аз денатуратсия | 95℃ | 2 дақиқа | 1 |
| 2 | Денатуратсия | 95℃ | 5 с | 45 |
| Табобат, васеъкунӣ, ба даст овардани флуоресцент | 60℃ | 14 с | ||
5. Таҳлили натиҷаҳо (лутфан ба Дастури истифодабарандаи асбоб муроҷиат кунед)
Пас аз реаксия, натиҷаҳо ба таври худкор захира карда мешаванд.Барои таҳлил "Таҳлил" -ро клик кунед ва асбоб ба таври худкор арзишҳои Ct-и ҳар як намунаро дар сутуни натиҷа шарҳ медиҳад.Натиҷаҳои назорати манфӣ ва мусбат бояд ба "6. Назорати сифат" мувофиқат кунанд.
6. Назорати сифат
6.1 Назорати манфӣ: Дар канали FAM Ct ё Ct>40 нест, Ct≤40 дар канали CY5 бо каҷи муқаррарии тақвият.
6.2 Назорати мусбӣ: Ct≤35 дар канали FAM бо каҷи муқаррарии амплификация, Ct≤40 дар канали CY5 бо каҷи амплификацияи муқаррарӣ.
6.3 Натиҷа дуруст аст, агар ҳамаи меъёрҳои дар боло зикршуда мувофиқ бошанд.Дар акси ҳол, натиҷа беэътибор аст.
Тафсири натиҷа
Натиҷаҳои зерин имконпазиранд:
| Арзиши Ct канали FAM | Арзиши Ct канали CY5 | Тафсир | |
| 1# | Не Ct ё Ct>40 | ≤40 | Вируси маймун манфӣ |
| 2# | ≤40 | Ягон натиҷа | Вируси маймун позитив |
| 3# | 40 ~ 45 | ≤40 | Санҷиши такрорӣ;агар он то ҳол 40 ~ 45 бошад, ҳамчун 1 # гузориш диҳед |
| 4# | Не Ct ё Ct>40 | Не Ct ё Ct>40 | Беэътибор |
ШАРҲ: Агар натиҷаи беэътибор пайдо шавад, намуна бояд ҷамъоварӣ ва дубора санҷида шавад.
Маълумот оид ба фармоиш
| Номи маҳсулот | Гурба.Не | Андоза | Намуна | Муҳлати нигоҳдорӣ | Транс.& Сто.Ҳарорат. |
| Маҷмӯаи PCR Real Time Virus Monkeypox | B001P-01 | 48 санҷиш / маҷмӯа | Экссудати зардоб/зада | 12 моҳ | -25 - 15 ℃ |
